細胞周期(cell cycle)是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過程，分為間期與分裂期兩個階段，其中間期又分為三個階段：G1、S和G2，如果細胞在G1期受到調(diào)控阻留，則會轉(zhuǎn)入G0期脫離細胞周期，在G0期的細胞仍然有進入細胞周期分裂的潛力。
G1期又稱合成前期，物質(zhì)代謝活躍，迅速合成RNA和蛋白質(zhì)，主要為下階段S期的DNA復制作好物質(zhì)和能量的準備；S期即DNA合成期，合成DNA和組蛋白，DNA復制所需要的酶都在這一時期合成；G2期為DNA合成后期，是有絲分裂的準備期，DNA合成終止，大量合成RNA及蛋白質(zhì)。
處在G2期的細胞DNA含量為G1期細胞的兩倍，可以通過DNA含量來區(qū)分兩種不同的細胞。此外，大量文獻證明，處在G2期的細胞體積大于G1期的細胞。因此我們可以通過細胞體積和DNA含量兩個指標來進行G1和G2期的細胞分選。實驗中采用的DyeCycle Green是一種細胞滲透性DNA染料，DyeCycle Green熒光信號越強則表明細胞中DNA含量越高，F(xiàn)SC和BSC信號則與細胞大小有關(guān)。
WOLF細胞分選儀能夠利用DyeCycle Green熒光強度表現(xiàn)細胞中DNA含量，由于DNA結(jié)合染料具有細胞毒性，會干擾基因組檢測，因此我們僅使用這種染料作為散點圖中G1門的框選步驟。如下圖所示，首先在G1峰繪制一個門并突出顯示為藍色，查看FSC/BSC散點圖上G1細胞出現(xiàn)的位置，然后在FSC/BSC散點圖中藍色突出顯示細胞處繪制一個G1細胞門。
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使用WOLF單細胞柔性分選儀對這個門中的細胞進行富集分選，收集到的細胞再進行回測，得到下圖左側(cè)結(jié)果，可以看出富集后G1門中的細胞占比從45.4%提升到了91.8%。
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分選后的G1細胞繼續(xù)進行24 h的培養(yǎng)，分選所得細胞的初始活率為90.1%，經(jīng)過24 h的培養(yǎng)后，活率約為74%（下圖左）。在24 h培養(yǎng)后對分選所得細胞又進行了一次分析，細胞仍保留了分裂功能，已經(jīng)有部分細胞進入S期和G2期（下圖右）。
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通過同樣的圈門邏輯我們也可以進行G2細胞的分析和分選，使用DyeCycle Green熒光強度表現(xiàn)細胞中DNA的含量，DNA含量高的細胞則被認為是處于G2期的細胞，G2期細胞標記為紅色，G1期細胞標記為藍色（下圖）。
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綜上，WOLF被證實可以溫和且準確的分選處于細胞周期不同階段的活細胞，分選后的細胞能夠有很高的純度和活性。而且，經(jīng)過 24 小時的培養(yǎng)后，細胞看起來很健康，并能夠繼續(xù)進入細胞周期的后續(xù)階段，進一步證明了這些細胞在WOLF上分選后仍能保持分裂功能，這一工作流程同樣適用于其他類型的細胞。
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