在此，我們將概述完整的工作流程：從細(xì)胞檢測、單細(xì)胞分選到使用QIAseq UPX試劑盒進(jìn)行單細(xì)胞RNA-Seq實(shí)驗(yàn)設(shè)計。此外，我們還舉例說明了典型的數(shù)據(jù)分析工作流程：從處理FCS流式數(shù)據(jù)到使用GeneGlobe NGS分析中心的集成云進(jìn)行RNASeq數(shù)據(jù)分析。

傳統(tǒng)的細(xì)胞分揀機(jī)使用高壓氣溶膠-電場偏轉(zhuǎn)技術(shù)，而WOLF則不同，它使用微流控細(xì)胞分選技術(shù)，在小于2 psi的壓力下溫和地分揀細(xì)胞。WOLF使用蠕動泵和低壓壓電硒鼓，將細(xì)胞準(zhǔn)確地分揀到2個不同的腔室（下圖A）。微流控是一次性無菌使用的，與細(xì)胞培養(yǎng)基等特定應(yīng)用緩沖液兼容。這樣就不會發(fā)生樣品交叉污染，樣品接觸到的所有東西都是完全一次性的（下圖B）。此外，WOLF和N1單細(xì)胞分裝機(jī)的體積不到2立方英尺，可以直接放置在生物安全柜中，實(shí)現(xiàn)完全無菌的環(huán)境，降低污染風(fēng)險（下圖C）。此外，WOLF還支持富集分選和單細(xì)胞分選兩種模式（下圖D）。

N1可將1至100個細(xì)胞直接分裝到96或384孔板中。此外，與細(xì)胞打印機(jī)和有限稀釋法相比，WOLF和N1有5個檢測參數(shù)，可提供更高的單細(xì)胞檢測率和活死細(xì)胞分辨率。為了證明WOLF從死亡細(xì)胞和碎片中分選出有活力細(xì)胞的能力，將熱處理（死亡）的CHO細(xì)胞和健康的CHO細(xì)胞按50:50的比例混合，分選后分配到96孔板中。混合細(xì)胞用碘化丙啶染色，以標(biāo)記死細(xì)胞。然后用WOLF從樣品中分辨出死細(xì)胞（下圖A）。分析結(jié)果顯示，60%的細(xì)胞為死細(xì)胞。分選后的分析表明，WOLF能夠?qū)⑺兰?xì)胞/碎片減少到只有6%（下圖B）。然后根據(jù)PI陰性/存活細(xì)胞門將健康的CHO細(xì)胞分選到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中（下圖B）。使用Synentec NyOne成像儀分析單細(xì)胞噴點(diǎn)效率（下圖C）。共分析了9個板。結(jié)果顯示，WOLF-N1在96孔板上的單細(xì)胞噴點(diǎn)效率平均為85%。這些結(jié)果與分選對照相似（下圖D），表明WOLF-N1平臺能夠溫和地分選細(xì)胞，而不會造成細(xì)胞死亡。