
樣品制備是任何實驗流程中的關鍵步驟。為了確保單細胞測序等下游應用的高質量結果,樣品必須純凈且不受檢索技術的影響。其中稀有或有限的細胞群通常更具有挑戰性,需要額外的富集步驟,以確保能分析到足夠的目標細胞以提供有意義的數據。雖然流式細胞分選(FACS?)已成為細胞分選方法的金標準,但在分選占比低的目標細胞時可能會很耗時。此外,當收集足夠的細胞用于下游應用時,過長的分選步驟可能導致大量細胞死亡。所以一個高效,快速和溫和的樣品制備儀器就至關重要,可以幫助我們跟隨細胞和分子生物學許多方面技術進步的腳步。
在真核生物和細菌中,翻譯啟動都需要mRNA、核糖體、起始tRNA和一組啟動因子等基本元件。自然界中,普遍可觀察到啟動蛋白質合成的典型機制和信號。然而,生物也可以使用其他啟動機制,特別是在病毒mRNA中。一些病毒劫持細胞機器,利用內部核糖體進入位點(IRES)通過非經典起始途徑翻譯一些mRNA,IRES作為一種高度結構化的RNA,在某些情況下甚至無需加帽和起始tRNA即可招募核糖體。
加速并統一藥物研發過程對于降低新藥開發成本至關重要。多樣化的化學和生物條件、專門的基礎設施以及現有分析方法與高通量、納升規模化學方法之間的不兼容性,使得整個藥物研發過程漫長且成本高昂。在此,我們展示了一個結合了芯片上化學合成、表征和生物篩選的“chemBIOS”平臺。我們開發了一種基于樹狀聚合物的表面圖案技術,能夠生成用于有機和水性液體的高密度納米滴陣列。每個板(每塊板上超過 50,000 個液滴)中的液滴可作為一個獨立的、空間上分離的納米容器,可用于溶液合成或分析測試。另外,一層銦錫氧化物涂層
當前有多種技術可用于體外分子互作檢測,每種技術都存在特定的優勢和不足之處,因此,對于特定的分子互作檢測,如何選擇更加合適的技術,是廣大科研人員面臨的一種挑戰。目前諸多方法中,歸納起來,可以分為微流控表面結合法(例如表面等離子共振技術(SPR)或switchSENSE技術)或溶液中檢測法(比如等溫滴定熱分析(ITC)或微尺度熱泳分析(MST))。溶液中檢測法在樣本制備方面存在優勢,同時不需要分子固定步驟,操作上更加簡便;而以分子固定為基礎的方法,對樣本的需求量較少,能夠提供底物分子與配體分子解離方
iPSC是非常脆弱敏感的細胞,傳統流式分選中的機械應力會通過激活與細胞應激或分化相關的基因掩蓋或改變scRNA-seq結果。因此,在分選細胞時盡量減少機械應力是很重要的。此外,在cDNA產生和文庫制備之前減少死細胞和碎片,可以提高cDNA文庫的質量。熒光激活細胞分選是用于富集特定細胞群同時避免死細胞和碎片的常用技術。然而,使用高壓噴嘴液滴分選的傳統細胞分選方法會對細胞產生機械剪切應力;誘導基因表達變化和/或RNA降解。
在細胞生物學和藥物研發中,傳統研究流程需在微孔板、離心管、PCR板等多平臺間轉移樣本,導致實驗變異大(跨平臺誤差>20%)、核酸損失高(低細胞數樣本回收率<50%)。例如,基因表達分析需多次轉移樣本,單細胞核酸損失率高達70%。本篇文章中德國卡爾斯魯厄理工學院團隊開發的“Cells-to-cDNAonChip”技術,通過液滴微陣列(DMA)平臺與I.DOT非接觸式納升級分配技術的結合,首次實現從活細胞培養到cDNA合成的全流程納升級集成,將試劑消耗降低至傳統方法的1/100,操作時間縮短33%。
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