
樣品制備是任何實驗流程中的關(guān)鍵步驟。為了確保單細胞測序等下游應(yīng)用的高質(zhì)量結(jié)果,樣品必須純凈且不受檢索技術(shù)的影響。其中稀有或有限的細胞群通常更具有挑戰(zhàn)性,需要額外的富集步驟,以確保能分析到足夠的目標細胞以提供有意義的數(shù)據(jù)。雖然流式細胞分選(FACS?)已成為細胞分選方法的金標準,但在分選占比低的目標細胞時可能會很耗時。此外,當收集足夠的細胞用于下游應(yīng)用時,過長的分選步驟可能導(dǎo)致大量細胞死亡。所以一個高效,快速和溫和的樣品制備儀器就至關(guān)重要,可以幫助我們跟隨細胞和分子生物學(xué)許多方面技術(shù)進步的腳步。
在真核生物和細菌中,翻譯啟動都需要mRNA、核糖體、起始tRNA和一組啟動因子等基本元件。自然界中,普遍可觀察到啟動蛋白質(zhì)合成的典型機制和信號。然而,生物也可以使用其他啟動機制,特別是在病毒mRNA中。一些病毒劫持細胞機器,利用內(nèi)部核糖體進入位點(IRES)通過非經(jīng)典起始途徑翻譯一些mRNA,IRES作為一種高度結(jié)構(gòu)化的RNA,在某些情況下甚至無需加帽和起始tRNA即可招募核糖體。
加速并統(tǒng)一藥物研發(fā)過程對于降低新藥開發(fā)成本至關(guān)重要。多樣化的化學(xué)和生物條件、專門的基礎(chǔ)設(shè)施以及現(xiàn)有分析方法與高通量、納升規(guī)模化學(xué)方法之間的不兼容性,使得整個藥物研發(fā)過程漫長且成本高昂。在此,我們展示了一個結(jié)合了芯片上化學(xué)合成、表征和生物篩選的“chemBIOS”平臺。我們開發(fā)了一種基于樹狀聚合物的表面圖案技術(shù),能夠生成用于有機和水性液體的高密度納米滴陣列。每個板(每塊板上超過 50,000 個液滴)中的液滴可作為一個獨立的、空間上分離的納米容器,可用于溶液合成或分析測試。另外,一層銦錫氧化物涂層
當前有多種技術(shù)可用于體外分子互作檢測,每種技術(shù)都存在特定的優(yōu)勢和不足之處,因此,對于特定的分子互作檢測,如何選擇更加合適的技術(shù),是廣大科研人員面臨的一種挑戰(zhàn)。目前諸多方法中,歸納起來,可以分為微流控表面結(jié)合法(例如表面等離子共振技術(shù)(SPR)或switchSENSE技術(shù))或溶液中檢測法(比如等溫滴定熱分析(ITC)或微尺度熱泳分析(MST))。溶液中檢測法在樣本制備方面存在優(yōu)勢,同時不需要分子固定步驟,操作上更加簡便;而以分子固定為基礎(chǔ)的方法,對樣本的需求量較少,能夠提供底物分子與配體分子解離方
iPSC是非常脆弱敏感的細胞,傳統(tǒng)流式分選中的機械應(yīng)力會通過激活與細胞應(yīng)激或分化相關(guān)的基因掩蓋或改變scRNA-seq結(jié)果。因此,在分選細胞時盡量減少機械應(yīng)力是很重要的。此外,在cDNA產(chǎn)生和文庫制備之前減少死細胞和碎片,可以提高cDNA文庫的質(zhì)量。熒光激活細胞分選是用于富集特定細胞群同時避免死細胞和碎片的常用技術(shù)。然而,使用高壓噴嘴液滴分選的傳統(tǒng)細胞分選方法會對細胞產(chǎn)生機械剪切應(yīng)力;誘導(dǎo)基因表達變化和/或RNA降解。
在細胞生物學(xué)和藥物研發(fā)中,傳統(tǒng)研究流程需在微孔板、離心管、PCR板等多平臺間轉(zhuǎn)移樣本,導(dǎo)致實驗變異大(跨平臺誤差>20%)、核酸損失高(低細胞數(shù)樣本回收率<50%)。例如,基因表達分析需多次轉(zhuǎn)移樣本,單細胞核酸損失率高達70%。本篇文章中德國卡爾斯魯厄理工學(xué)院團隊開發(fā)的“Cells-to-cDNAonChip”技術(shù),通過液滴微陣列(DMA)平臺與I.DOT非接觸式納升級分配技術(shù)的結(jié)合,首次實現(xiàn)從活細胞培養(yǎng)到cDNA合成的全流程納升級集成,將試劑消耗降低至傳統(tǒng)方法的1/100,操作時間縮短33%。
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